llecmets

未至三十期 wrote,
观察到有价值的现象了，说明你还是很上道的，恭喜啊。我以前做实验的时候也经常碰到这个问题，可能是干细胞开始进行ASYMMETRIC DIVISION的迹象。能够以爆炸性的速度增殖的只有TRANSIT AMPLIFYING CELLS。这个群体的细胞中，有一部分是干细胞的F1~F2子代，但由于ASYMMETRIC的原因，它们在增殖上面的特征已经跟亲代相去很远了。 LLECETS可能没做过分选后培养，其实这个很简单的，假如你把环境换了，这种现象的价值就要打折扣了。事实上我们都没有改变培养条件。
关于纯度的问题，我想天是蓝的你没明白我的意思。我所说的纯度问题，是指分选出来的细胞里面真正是SP细胞的比例。这个用细胞计数或者算存活比例是不能解决的。只是通过其他检验SP细胞性质的实验才发现这个问题。我说的50%左右的比例，是流式细胞仪方面的人员告诉我的，个人感觉他们是专家，应该可信。至于说存活率，可以达到将近100%，只除了刚才说的掺杂进去的NON-SP细胞会在传数代后死去。

llecmets

天是蓝的 wrote,
我说的分选后活细胞计数比细胞仪上的显示数字是计算和估计我分选后可能成活的细胞数，不能算纯度的。
纯度判断是用分选得到的“干细胞”再作分析。这种判断在很多文献里都说了，我记得卵巢癌的一篇文章里说的，他们分选得到sp后再分析，结果sp比例超过95％，我用同样的方法试了一次，只有75％左右，由于后来的细胞数量越来越少，没试第二次。当然，未至三十期说的分选后检验sp细胞性质也可以做的。但是分选后到实验，细胞只要贴壁一定时间就会分化的，本身就不纯了，那检测的
意义值得商榷。
另外，sp和nsp，并不是nsp不能传代，如果你用的是细胞株，nsp传的可能比sp还快。我用nsp传了很多代，后来细胞数实在太多，留了一瓶分析用，其他全丢弃了。

llecmets

未至三十期 wrote,
我并没有说过NSP不能传代，但是传3~4代后就死去的现象确实存在，而且我在实验中还不止一次观察到这种情况，跟文献上说的一样，看来是比较可信的了。

你说的那种做法我跟别的战友说了，其实很有点投机取巧的味道。反正大家根据自己的实验设计要求选择就好，我觉得没什么问题。

至于说培养后分化的问题，其实这个大家都明白。分化是自然趋势，即使是正常的干细胞，在体内环境中也是因为有了多种屏障机制才被保持在不分化状态的。因此我们如果希望分选出来的细胞保持不分化，自然需要一些特别措施。而且细胞培养了以后是否分化，有什么影响，说到底还是以自己的实验要求来衡量。只不过我们每一个做肿瘤干细胞研究的人都要知道这些问题，在设计的时候要周全考虑而已

llecmets

I wrote,
多谢未至三十期的夸奖和鼓励 ；关于爆炸性增殖用过渡放大细胞确实可以解释，如果真是这样的话，那么发生爆炸性增殖的诱因是什么呢？因为环境不变，或许只能通过干细胞自发性非对称性分裂来解释了，那么如何证明是自发而排除他发？有这方面的研究没？恳请指点

llecmets

天是蓝的 wrote,
不明白未至三十期朋友说的是我哪方面投机取巧 。个人看法，只要能达到自己的目的，怎么做都可以。何况每个人自己做的方面不同重点也不同，自然对不同的地方有不同的投入程度，其他对自己不是重点的地方，能简单就简单，只要能说明问题就行。因为不知道您说的是我哪个地方的投机取巧，也就不知道您说的是否为我实验的“七寸”，还请说明，如果是，我要改过来才好

至于说分化，我觉得控制分化很重要。现在肿瘤干细胞研究领域最大的一个问题就是干细胞纯度问题，而胚胎干细胞经过多年的研究，现在有很多成熟的手段来控制它的分化，所以技术上控制肿瘤干细胞的分化是非常重要的一种趋势。我希望的是大家能从胚胎干细胞的成熟技术中获得点idea，也对胚胎干细胞和成体干细胞分化控制的异同点多一些了解。

dortianr

在广州那个地方分离比较便宜？

jj19810704

我是做肿瘤干细胞的新手。
请问用FACS分选SP细胞，一小时能分选出多少SP细胞呀？我的试验经费有限。
在广州每小时800的公司是哪个，联系方式能给我吗，我也想去那里分。或者其他能做这个分选的公司也行。
谢谢！
现在我找不到分选SP细胞的地方，试验面临流产，5555555555555！

gzgygy

从来没听说过广州有公司有设备和技术可以分SP细胞！

gzgygy

SP研究交给公司来做是自寻死路的愚蠢想法。

jfzeng

咱们这位干友真的着急啊，哪位在广州的好心人帮帮他吧！

gzgygy

在广州要做SP分选的可以发站内短消息给我。
请说明课题意义和思路。
先此声明，SP分选是一个相对高起点的研究手段，现在还想跟风做identification类型的课题而不好好想点子另辟蹊径就是在浪费所有相关人员的时间和设备能力，我一律不予接受。

jfzeng

版主提醒你，内容与主题不符。为了维护论坛的清洁明了，希望下不再犯。

[ 本帖最后由 jfzeng 于 2008-3-1 14:57 编辑 ]

jj19810704

多谢好心人的帮忙，雪中送碳呀！

幽绪西流

学习了.................

DiDi

1500￥一个小时！！！真是赚死了…………