RNAi的技术已被广泛应用,但是siRNA要如何正确高效的运送到细胞内一直是个困扰研究者已久的难题......。现在就由Panomics为您带来解决方案。
思考-1:在siRNA的运送过程会遇到的问题?
由于RNA本身较不稳定、易断裂,加上合成好的siRNA因为结构太小、序列太短等因素,常常导致转染效果不理想,而无法发挥基因抑制的结果。因此,当需要运送siRNA到胞内时,选择siRNA专用的转染试剂是一件非常重要的事情。常用的方法,依据原理可分为下列三种形式:
脂质体介导:利用带有正电荷的疏水性脂质体介导,而将siRNA导入细胞质中,但易被脂肪含量高的脂质困住。
多肽介导:利用具有穿膜能力的多肽,与siRNA结合,而把siRNA带入细胞。
电转:将细胞置于非常高的电场中,细胞膜的通透性增加,siRNA被扩散进细胞内,但对细胞伤害太大,往往使得细胞存活数目很低,并不适合各种细胞使用。
思考-2:你觉得哪种多肽介导试剂较好?
1、共价性介导试剂:要加入交联物与转运物共价性的结合,使得所有的转运物都会带上这个多肽。
2、非共价性介导试剂(MPG peptide):利用正负电荷间的电子亲和力与转运物结合,进入细胞后能与转运物分开。
DeliverX/Plux siRNA transcription Kits中的MPG Peptide由三部分组成:一段分离自病毒的小片段双极性多肽。可以自由的融入细胞膜;一段的连接体及另一部分能透过电子亲和力与siRNA结合的多肽。MPG peptide如此将siRNA包裹起来后,可以不经过细胞膜上的受体介导、不经过内吞作用,正确的把siRNA送入细胞。
优点:
1、完全无毒性:可用于体内;
2、非内吞作用,不被内吞体降解;
3、不靠膜受体介导,任何细胞都可以轻松进入;
4、利用电子亲和力与转运物结合,非共价修饰;
5、操作流程简单:无毒不用洗,有、无血清下都可以进行;
6、提供19株细胞优化方案
欲了解更多信息请联系Email:
junminpan@163.com,
houhuimin6442@163.com
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本帖最后由 bgilt 于 2008-10-16 13:49 编辑 ]